溶藻弧菌肽聚糖和vp28-siRNA对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用Effects of Vibrio alginolyticus Peptidoglycn and vp28-si RNA on Litopenaeus vannamei Against White Spot Syndrome Virus
朱卫卫,邱德全,甘桢,鲁义善,简纪常
摘要(Abstract):
对感染白斑综合征病毒(WSSV)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05和0.10μg/μL的vp28-si RNA,干扰效果实验表明,si RNA最佳浓度为0.10μg/μL。凡纳滨对虾感染WSSV 24 h时注射0.10μg/μL的vp28-si RNA,检测免疫后不同时间点的干扰效果。结果表明:在注射vp28-si RNA 6 h后,实验组与对照组WSSV病毒拷贝数差异有统计学意义(P<0.05);在48 h时实验组病毒拷贝数急剧下降,对照组则保持较高水平,可较好干扰WSSV病毒复制,干扰效果持续120 h,对凡纳滨对虾的保护率为40%。凡纳滨对虾用0.10 mg/m L肽聚糖(Peptidoglycan)免疫24 h后感染WSSV,检测6、12、24 h注射vp28-si RNA的保护率。结果显示:6 h注射组的保护率为80%,12 h注射组为63.33%,24 h注射组为56.67%。凡纳滨对虾在肽聚糖和vp28-si RNA作用后,可增加其对WSSV抗感染作用,降低死亡率,干扰时间越早,对对虾的保护率越高。
关键词(KeyWords): 凡纳滨对虾;免疫增强剂;RNA干扰;肽聚糖;vp28-si RNA;白斑综合征病毒
基金项目(Foundation): 广东省海洋渔业科技推广专项项目(A201100D03);; 广东省海洋经济创新发展区域示范专项项目(GD2012-A03-012);; 湛江市科技计划项目(2013A03021)
作者(Author): 朱卫卫,邱德全,甘桢,鲁义善,简纪常
参考文献(References):
- [1]刘芳,杨跃寰.细菌细胞壁肽聚糖的研究[J].四川理工学院学报(自然科学版),2011,24(6):628-631.
- [2]彭小云.脂多糖和枯草芽孢杆菌对草鱼免疫相关基因表达的影响[D].武汉:华中农业大学,2013.
- [3]雷爱莹,江林源.蜈蚣藻多糖对凡纳滨对虾免疫相关基因表达的影响[J].南方农业学报,2014,45(4):682-686.
- [4]陈国福,张春云,王光玉,等.A3_肽聚糖对凡纳对虾幼体生长及抗病毒感染力的影响[J].水产科学,2008,5(11):584-587.
- [5]孟凡伦,马桂荣,孔健.乳链球菌SB900肽聚糖对中国对虾免疫功能的影响[J].山东大学学报(自然科学版):1999,34(1):90-95.
- [6]王秀华,黄倢,宋晓玲.免疫增强剂——肽聚糖在对虾养殖中的应用[J].海洋水产研究,2003,24(1):69-74.
- [7]雷质文,黄倢,梁成珠,等.白斑综合症病毒的生物学活性[J].海洋科学,2002,26(3):26-31.
- [8]ZHAN W B,WANG Y H,YU K K,et al.White spot syndrome virus infection of cultured shrimp in China[J].J Aquat Anim Health,1998,10(4):40-410.
- [9]MOMOYANA K,NAKANO H,KOUBE H.Mass mortalities of cultured Kuruma Shrimp,Penaeus japonicus,in Japan in 1993:epizootiological survey and infection trials[J].Fish Pathology,1994,29(2):135-139.
- [10]国子娟.基于细胞培养筛选抗对虾白斑综合征病毒(WSSV)中草药及其实验效果评价[D].上海:上海海洋大学,2014.
- [11]郭志勋,李卓佳,管淑玉.抗对虾白斑综合症病毒(WSSV)中草药的筛选及番石榴叶水提取物对WSSV致病性的影响[J].广东农业科学,2011,38(21):129-131.
- [12]郝忱,万金娟,沈美芳,等.中草药添加剂对克氏原螯虾生长及免疫力的影响[J].江苏农业学报,2014,30(2):363-369.
- [13]杨明.中草药制剂在凡纳滨对虾抗病性能中的应用研究[D].厦门:集美大学,2012.
- [14]朱卫卫,邱德全,甘桢,等.溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用[J].广东海洋大学学报,2015,35(6):40-46.
- [15]ITAMI T,ASANO M,TOKUSHIGE K,et al.Enhancement of disease resistance of kuruma shrimp,Penaeus japonicus after oral administ ration of peptidoglican derived from Bifidobacterium thermophilum[J].Aquaculture,1998,164(1/2/3/4):277-288.
- [16]王秀华,黄倢,宋晓玲.免疫增强剂—肽聚糖在对虾养殖中的应用[J].海洋水产研究,2003,24(1):69-74.
- [17]韦秀梅.抗对虾白斑症病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28独特型单克隆抗体的研制与应用[D].山东:中国海洋大学,2010.
- [18]施泓,阮灵伟.白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28单链抗体的酵母表面展示及其抗病毒特性的初步研究[J].台湾海峡,2012,31(3):368-374.
- [19]LI X A,LIU Q H,HOU L,et al.Effect of VP28 DNA vaccine on white spot syndrome virus in Litopenaeus vannamei[J].Aquaculture International,2010,18(6):1035-1044.
- [20]ROBALINO J,BROWDY C L,PROIR S,et al.Induction of antiviral immunity by double-stranded RNA in a marine invertebrate[J].J Virol,2004,78(19):10442–10448.
- [21]WESTENBERG M,HEINHUIS B,ZUIDEMA D,et al.si RNA injection induces sequence-independent protection in Penaeus monodon against white spot syndrome virus[J].Virus Res,2005,114(1/2):133–139.
- [22]XU J Y,HAN F,ZHANG X.Silencing shrimp white spot syndrome virus(WSSV)genes by si RNA[J].Antiviral Res,2007,73(2):126–131.
- [23]谢警鸿,邱德全,刘春晓,等.溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾虾青素、免疫指标及保护率的影响[J].广东海洋大学学报,2013,33(1):50-55.
- [24]刘春晓.溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾常用免疫指标、脂肪酸含量及基因表达差异的影响[D].湛江:广东海洋大学,2014.
- [25]李咏梅,黎铭,陈晓汉,等.RNA干扰南美白对虾白斑病毒vp28基因的体外研究[J].西南农业学报,2010,23(6):2083-2087.
- [26]程晓燕,刘庆慧,黄倢,等.实时荧光定量PCR检测对虾白斑综合症病毒方法的建立[J].安徽农业科学,2010,38(26):14265-14267
- [27]VAN HULTEN M C,WITTEVELDT J,SNIPPE M,et al.White spot syndrome virus envelope protein VP28 is involved in the systemic infection of shrimp[J].Virology,2001,285(2):228-2339.
- [28]XU J Y,HAN F,ZHANG X B.Silencing shrimp white spot syndrome virus(WSSV)genes by si RNA[J].Antiviral Research,2007,73(2):126-131.
- [29]ZHU F,ZHANG X B.The antiviral vp28-si RNA expressed in bacteria protects shrimp against white spot syndrome virus(WSSV)[J].Aquaculture,2011,319(3/4):311-314.
- [30]黄添枝.RNA干扰在对虾抗病毒免疫中的作用[D].浙江:浙江大学,2013.
- [31]TIU S H K,CHAN S M.The use of recombinant protein and RNA interference approaches to study the reproductive functions of a gonad-stimulating hormone from the shrimp Metapenaeus ensis[J].FEBS Journal,2007,274(17):4385-4395.