创伤弧菌和哈氏弧菌双重PCR检测方法的建立及初步应用Establishment and Preliminary Application of the Duplex PCR to Detection of Vibrio vulnificus and Vibrio harveyi
陈福艳,程光平,欧阳贤华,陈晓汉,梁万文,韦友传,黄婷,杨学明,陈明,王瑞,李丽萍,韦明利
摘要(Abstract)：
根据创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的溶细胞毒素基因序列和哈氏弧菌(Vibrio harveyi)的toxR基因序列,分别设计并合成两对特异性引物,通过PCR反应条件优化,测试两种菌的特异性和敏感性,建立双重PCR方法,同时快速检测V.vulnificus和V.harveyi。结果表明:纯培养V.vulnificus和V.harveyi的检测灵敏度分别是12 cfu/mL和18 cfu/mL,与无乳链球菌、海豚链球菌、副溶血弧菌及美人发光杆菌无交叉反应;此PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性,具快速、高效等优点,对细菌V.vulnificus和V.harveyi诊断与防治具有较好的临床应用性。
关键词(KeyWords)： 双重PCR;创伤弧菌;哈氏弧菌
基金项目(Foundation): 广西重点实验室计划项目(12-A-03-01);; 广西科技创新推广扶持项目(桂渔牧科1204905、桂渔牧科1204902);; 广西区直属公益性专项资金项目(GXIF-2012-02、GXIF-2010-05)
作者(Author): 陈福艳,程光平,欧阳贤华,陈晓汉,梁万文,韦友传,黄婷,杨学明,陈明,王瑞,李丽萍,韦明利
参考文献(References)：
- [1]梁利国,秦国民,杨家新,等.哈氏弧菌特异性检测方法的建立和应用[J].水产科技情报,2010,37(5):214-217.
- [2]何闪闪,薛长湖,李兆杰,等.水产品中创伤弧菌的快速检测与分离[J].中国食品学报,2005,5(3):86-90.
- [3]Pujalte M J,Sitji B A,Macian M C,et a1.Virulence andmolecular typing of Vibrio harveyi strains isolated from cultureddentex,gilthead sea bream and European sea bass[J].Systematicand Applied Microbiology,2003,26(2):284-292.
- [4]卢中秋,季秉熙,黄唯佳,等.创伤弧菌败血症的临床和流行病学特点,中国急救医学[J],2003,23(7):470-471.
- [5]邢丽萍.创伤弧菌生物学研究进展[J].中国卫生检验杂志,2011,21(7):1833-1836.
- [6]姚东瑞,朱明,陈丽,等.基于toxR基因病原哈氏弧菌PCR检测方法的建立[J].水产科学,2011,30(9):559-562.
- [7]张新中,张世秀,李海平,等.多重PCR在创伤弧菌快速检测中的应用[J].水产科学,2007,26(12):668-670.
- [8]徐素惠,曾静,除守建,等.PCR与Real-time PCR方法检测海产品创伤弧菌的比较[J].中国兽医杂志,2010,46(8):73-75.
- [9]张新中,文万侥,徐先栋,等.双重PCR在创伤弧菌(Vibriovulnificus)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytious)快速检测中的应用[J].现代渔业信息,2007,22(9):11-13.
- [10]梁利国,秦国民,杨家新,等.哈氏弧菌特异性检测方法的建立和应用[J],水产科技情报,2010,37(5):214-217.
- [11]张新中,张世秀,李海平,等.多重PCR在创伤弧菌快速检测中的应用[J].水产科学,2007,26(12):668-670.
- [12]许斌福,林天龙,董传甫,等.鳗鲡创伤弧菌的分子鉴定[J].中国人兽共患病杂志,2005,21(11):995-997,980.
- [13]王斌,于兰萍,胡亮,等.红鳍东方鲀皮肤溃烂病病原菌的分离与鉴定[J].中国水产科学,2008,15:352-358.
- [14]石亚素,童国忠,薛超波,等.舟山养殖大黄鱼烂尾病中哈氏弧菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国卫生检验杂志,2005,15(3):267-269.