鲶爱德华氏菌间接酶联免疫快速检测法的建立Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for Rapid Detection of Edwardsiella ictaluri
李重实,李强,刘海燕,叶仕根,李华
摘要(Abstract):
用鲶爱德华氏菌兔抗血清作为一抗,碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗兔IgG作为酶标二抗,建立黄颡鱼"红头病"病原菌—鲶爱德华氏菌的间接酶联免疫(ELISA)快速检测法,并优化检测条件。抗原最佳包被浓度为107/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶211,病原菌的检测灵敏度为105/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,与迟钝爱德华氏菌、弧菌等13种标准菌株无交叉。应用上述技术对人工感染发病鱼中分离的优势菌进行检测,结果表明阳性检出率为80%;对自然发病黄颡鱼体内分离获得的20株优势菌检测结果表明,12株菌为鲶爱德华氏菌。
关键词(KeyWords): 鲶爱德华氏菌;酶联免疫吸附实验(ELISA);黄颡鱼;“红头病”;多克隆抗体
基金项目(Foundation): 国家十一五科技支撑项目(2006BAD09A01);; 辽宁省海洋与渔业厅项目(201005);; 辽宁省教育厅高等学校科研计划(2008143);; 辽宁省自然科学基金(20032097)
作者(Author): 李重实,李强,刘海燕,叶仕根,李华
参考文献(References):
- [1]Ye S G,Li H,Qiao G,et al.First case of Edwardsiella ictaluri infection in China farmed yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco[J].Aquaculture,2009,292(7):6-10.
- [2]耿毅,汪开毓,范方玲,等.养殖黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)鮰爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)的分离鉴定与生物学特性研究[J].海洋与湖沼,2010,41(1):61-67.
- [3]郑善坚.黄颡鱼红头病病原研究[J].水产科学,2009,28(12):757-759.
- [4]邓先余,罗文,谭树华,等.黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)"红头病"病原菌迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的分离及鉴定[J].海洋与湖沼,2008,35(5):511-515.
- [5]Wang J,Yan Q P,Su Y Q,et al.Study on indirect ELISA method for detecting Vibrio parahaemolyticus in cultured Pseudosciaena crocea[J].Journal of Oceanography In Taiwan Strait,2001,20(3):346-350.
- [6]胡大雁,钱冬,刘问,等.嗜水气单胞菌BA-ELISA的建立及其在病原检测中的应用[J].华中农业大学学报,2008,27(1):80-85.
- [7]白方方,兰建新,王燕,等.迟缓爱德华氏菌间接ELISA快速检测法[J].中国水产科学,2009,16(4):619-625.
- [8]鄢庆枇,苏永全,王军,等.用LPS抗血清进行溶藻弧菌间接ELISA检测[J].青岛海洋大学学报,2002,32(增刊):267-271.
- [9]Panangala,V S,Shoemaker C A,McNulty S T,et al.Intra-and interspecific phenotypic characteristics of fish-pathogenic Edwardsiella ictaluri and E.tarda[J].Aquaculture Research,2006,37(1):49-60.
- [10]Panangala V S,van Santen V L,Shoemaker C A,et al.Analysis of 16S–23S intergenic spacer regions of the rRNA operons in Edwardsiella ictaluri and Edwardsiella tarda isolates from fish[J].Journal of Applied Microbiology,2005,99(3):657-669.