杨林,蔡佳,简纪常,颜鹏,鲁义善,吴灶和

• 1:广东海洋大学水产学院
• 2:广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室
• 3:仲恺农业工程学院

摘要(Abstract)：

通过PCR方法克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)NEDD4结合蛋白基因1(简称CiN4BP1)的开放阅读框(ORF)序列,将扩增产物与pET-32a(+)表达载体相连接,构建原核表达载体pET-N4BP1,对重组质粒进行酶切和测序鉴定,然后将其导入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,检测该蛋白表达情况。SDS-PAGE分析表明,在温度为37℃,IPTG浓度为0.06 mmol/L,诱导时间为4 h时,N4BP1重组融合蛋白的表达量最高,蛋白分子质量为40.2 ku,与软件预测值大小相符,该蛋白主要以包涵体形式表达。利用His Trap HP亲和柱纯化目的蛋白;Western blot分析表明,N4BP1融合蛋白能与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应,说明该表达的蛋白为目的蛋白。

关键词(KeyWords)： 草鱼;N4BP1;原核表达;表达条件;优化;纯化;Western blot分析

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家973计划(2009CB118704)

作者(Author): 杨林,蔡佳,简纪常,颜鹏,鲁义善,吴灶和

参考文献(References)：

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