巴马香猪Hsp70基因的克隆、生物信息学分析及其在猪肠上皮细胞IPEC-J2中的表达Cloning, Biological Analysis of Hsp70 Gene in Bama Miniature Pig and Its Expression in Intestinal Porcine Epithelial Cell(IPEC-J2)
韦美兰,徐汉进,雍艳红,贾汝敏,赵云涛,巨向红
摘要(Abstract):
为研究热应激蛋白70(HSP70)在巴马香猪(Sus scrofa domestica)耐热中的作用,利用NCBI公布的猪Hsp70基因序列设计引物,用RT-PCR克隆巴马香猪Hsp70基因。核酸序列分析表明,巴马香猪Hsp70基因开放阅读框(ORF)长1 932 bp,编码643个氨基酸。该蛋白分子质量为71.1 ku,等电点(PI)为5.88,与野猪、人、牛、羊、犬和鸡的同源性分别为99.2%、82.8%、83.2%、83.6%、82.4%和77.7%。该蛋白非叶绿体转运肽和线粒体导肽,亦非信号肽分泌通道,存在多个明显的疏水区,其中397位疏水性最强,达2.211。将该基因的ORF与真核表达载体pc DNA 3.1/V5-HisTOPO连接构建真核表达载体,并转染IPEC-J2细胞,荧光定量PCR及Western blot检测可见其在基因和蛋白水平的高量表达。
关键词(KeyWords): 巴马香猪;Hsp70基因;克隆;真核表达
基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(31101862;31472243)
作者(Author): 韦美兰,徐汉进,雍艳红,贾汝敏,赵云涛,巨向红
参考文献(References):
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