实时荧光定量PCR检测鳜IgM mRNA标准品质粒的构建Construction of the Standards for Detecting IgM mRNA of Siniperca chuatsi with Real-time Quantitative PCR
刘雨果,潘厚军,陈偿,巩华,石存斌,吴淑勤
摘要(Abstract)：
利用SYBR Green I荧光定量PCR技术,建立鳜IgM-DNA定量标准品的制备方法。从浸泡免疫后的鳜头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得预期质粒梯度稀释后构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明,当标准品的浓度在3.29×102～3.29×108拷贝/μL时,模板浓度与循环阈值(Ct)间的线性关系良好,相关系数r2达到0.999;融解曲线分析显示具特异的单个峰,表明扩增产物特异性非常好。此法制备的重组质粒标准品可用于对鳜IgM基因的转录水平进行测定。
关键词(KeyWords)： 鳜;IgM基因;实时荧光定量PCR
基金项目(Foundation): 国家科技支撑计划(2006BAD03B05);; 广东省自然科学基金(04001503)
作者(Author): 刘雨果,潘厚军,陈偿,巩华,石存斌,吴淑勤
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