梁金荣,许銮佳,李玲,郭慧,申玉春

• 1:广东海洋大学水产学院/湛江市海洋生态与养殖环境重点实验室

摘要(Abstract)：

【目的】研究凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)miRNA-184 [microRNA-184(miR-184),记作LvmiR-184]在健康虾及染病虾中的表达,探讨其免疫功能。【方法】用茎环法克隆鉴定凡纳滨对虾LvmiR-184,通过荧光定量PCR检测LvmiR-184在对虾血淋巴、肝胰腺、鳃、肌肉、心脏、胃、肠和眼柄等8个组织中的分布。对凡纳滨对虾注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),检测LvmiR-184不同时间点的响应变化。对感染副溶血弧菌的凡纳滨对虾分别注射0.3、3.0和30.0 ng的mi R-184模拟物和抑制物,检测不同时间点对虾血细胞凋亡率。【结果与结论】LvmiR-184在所有组织中均有表达,在胃中表达量最高,其次是肌肉,鳃表达量最低。注射副溶血弧菌后1.5 h,LvmiR-184表达量显著上调;在24 h达到峰值,较对照组高8.25倍;对照组则维持在较低的水平。模拟物、抑制物注射量为30 ng时对虾血细胞凋亡率差异有统计学意义(P <0.05);与对照组凋亡率相比,注射模拟物6 h后提高62%。LvmiR-184可调控凡纳滨对虾的血细胞凋亡。

关键词(KeyWords)： 凡纳滨对虾;microRNA;基因克隆;基因表达;细胞凋亡

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(31600321)

作者(Author): 梁金荣,许銮佳,李玲,郭慧,申玉春

参考文献(References)：

• [1]王铵静,杨奇慧,谭北平,等.大豆酶解蛋白对凡纳滨对虾幼虾生长性能、血清生化指标、非特异性免疫力和抗病力的影响[J].广东海洋大学学报,2018,38(1):14-21.
• [2]黄雪敏,梁华芳,薛明,等.凡纳滨对虾烂尾病病原的分离鉴定及药敏分析[J].广东海洋大学学报,2019,39(4):42-48.
• [3]杨浩.miR-140-5p通过靶向调节TGFBR1和FGF9抑制肝细胞癌增殖和侵袭转移[D].长沙：中南大学,2013.http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?dbcode=CDFD&filename=1013358098.nh.
• [4]陈辉,王赛,汪丽娜.microRNA-214在心脏保护作用的研究进展[J].湖北科技学院学报(医学版),2019,33(6):543-547.
• [5]闸雯俊,常萌,游艾青.microRNA对昆虫生长和发育的调控[J].湖北农业科学,2019,58(22):198-202;210.
• [6]成磊.mi RNA介导靶基因沉默的分析与识别[D].南京：南京航空航天大学,2011.http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10287-1011292071.htm
• [7]池明.采用人造小RNA技术抑制马铃薯多酚氧化酶的研究[D].杨凌：西北农林科技大学,2014.http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10712-1015513129.htm.
• [8]陶梦圆,李长平,伦镜盛,等.源于凡纳滨对虾血蓝蛋白的化学合成肽段的免疫调控活性[J].中国水产科学,2019,26(5):844-851.
• [9]章双,黎铭,董晓慧,等.凡纳滨对虾输入蛋白α1基因的克隆与表达分析[J].广东海洋大学学报,2016,36(3):1-8.
• [10]卢芷程,许銮佳,卢文宇,等.溶藻弧菌对凡纳滨对虾血细胞毒性及细胞凋亡和免疫相关基因的影响[J].南方农业学报,2018,49(12):2559-2565.
• [11]KAEWKASCHOLKUL N,SOMBOONVIWATB K,ASAKAWA S,et al.Shrimp miRNAs regulate innate immune response against white spot syndrome virus infection[J].Developmental&Comparative Immunology,2016,60:191-201.
• [12]庞鑫,马春林,廖世奇,等.小鼠肝脏MicroRNA的提取与分离[J].中国生物化学与分子生物学报,2011,27(11):1067-1072.
• [13]GUO H,LU Z C,ZHU X W,et al.Differential expression of micro RNAs in hemocytes from white shrimp Litopenaeus vannamei under copper stress[J].Fish&Shellfish Immunology,2018,74:152-161.
• [14]卓宏标,郑秋耀,梁华芳,等.波纹龙虾蜕壳周期的呼吸排泄和血淋巴生理学[J].广东海洋大学学报,2019,39(5):24-30.
• [15]LIU C M,TENG Z Q,SANTISTEVAN N J,et al.Epigenetic regulation of miR-184 by MBD1 governs neural stem cell proliferation and differentiation[J].Cell Stem Cell,2010,6(5):433-444.
• [16]EMDAD L,JANJIC A,AlZUBI M A,et al.Suppression of mi R-184 in malignant gliomas upregulates SND1 and promotes tumor aggressiveness[J].Neuro-Oncology,2015,17(3):419-429.
• [17]WANG J X,GAO J,DING S L,et al.Oxidative modification of miR-184 enables it to target Bcl-xL and Bcl-w[J].Molecular Cell,2015,59(1):50-61.
• [18]刘秀娟.Mi R-184和mi R-150通过靶向自噬基因促进肾脏系膜细胞衰老[D].北京：中国人民解放军医学院,2014.http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?dbcode=CDFD&dbname=CDFD&filename=1015521650.nh.
• [19]XU W N,LIU W B,YANG W W,et al.Identification and differential expression of hepatopancreas microRNAs in red swamp crayfish fed with emodin diet[J].Fish&Shellfish Immunology,2014,39(1):1-7.
• [20]YANG L,YANG G,ZHANG X B.The miR-100-mediated pathway regulates apoptosis against virus infection in shrimp[J].Fish&Shellfish Immunology,2014,40(1):146-153.
• [21]OU J T,LI Y,DING Z F,et al.Transcriptome-wide identification and characterization of the Procambarus clarkii microRNAs potentially related to immunity against Spiroplasma eriocheiris infection[J].Fish&Shellfish Immunology,2013,35(2):607-617.
• [22]XU P,GUO H Q,WANG H H,et al.Identification and profiling of microRNAs responsive to cadmium toxicity in hepatopancreas of the freshwater crab Sinopotamon henanense[J].Hereditas,2019,156(1):34.
• [23]HUGHES A E,BRADLEY D T,CAMPBELL M,et al.Mutation altering the miR-184 seed region causes familial keratoconus with cataract[J].The American Journal of Human Genetics,2011,89(5):628-633.
• [24]兰萍,宋晓玲,张辉,等.美人鱼发光杆菌对凡纳滨对虾非特异性免疫功能及抗病力的影响[J].渔业科学进展,2010,31(1):65-73.
• [25]GREEN D R.The end and after:how dying cells impact the living organism[J].Immunity,2011,35(4):441-444.
• [26]SUN R,QIU L M,YUE F,et al.Hemocytic immune responses triggered by Cp G ODNs in shrimp Litopenaeus vannamei[J].Fish&Shellfish Immunology,2013,34(1):38-45.