草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测Construction, Transformation, and Self-Activity Research of Bait Recombined Vector with vp5 Gene
谢吉国,闫秀英,简纪常,吴灶和
摘要(Abstract)：
根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。
关键词(KeyWords)： 草鱼呼肠孤病毒;酵母双杂交系统;诱饵载体;自激活性
基金项目(Foundation): 国家973计划(2009CB118704)
作者(Author): 谢吉国,闫秀英,简纪常,吴灶和
参考文献(References)：
- [1]Fields S,Song O.A novel genetic system to detect protein-protein interactions[J].Nature,1989,340:245-246.
- [2]张莉,黄倢,戴继勋.可应用于病毒受体研究的几种生物技术途径[J].海洋水产研究,2006,27(1):81-86.
- [3]王丽梅,魏传垠.酵母双杂交技术及其在分子生物学中的应用[J].综述与进展,2001,30(10):28-30.
- [4]刘畅.酵母双杂交系统在药物作用靶位点研究中的应用进展[J].国际检验医学杂志,2007,28(7):613-615.
- [5]张莉,黄倢,戴继勋.酵母双杂交系统用于WSSV粘附蛋白VP37相互作用的宿主蛋白基因的初步研究[J].海洋水产研究,2005,26(2):73-78.
- [6]Chen J,Lu X J,Yang H Y,et al.An interaction between leukocyte cell-derived chemotaxin 2 and transferrin of ayu,Plecoglossus altivelis[J].Fish shellfish Immunol,2009,26(3):536-542.
- [7]王维新,黄倢,高天翔.酵母双杂交系统用于WSSV结构蛋白V P39相互作用的宿主蛋白基因的初步研究[J].海洋湖沼通报,2010,1(2):11-16.
- [8]Rangel A A,Roekemann D D,Hetrick F M,et al.Identification of grass carp hemorrhage virus as a new genogroup of aquareovirus[J].General virology,1999,80(9):2399-2402.
- [9]Cai L,Sun X Y,Shao L,et al.Functional investigation of grass carp reovirus nonstructural protein NS80[J].Virology journal,2011,8:168.
- [10]Seng E K,Fang Q,Lam T J,et al.Development of rapid,sensitive and specific diagnostic assay for fish Aquareovirus based on RT-PCR[J].Virological methods,2004,118(2):111-122.
- [11]王雅.草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位[D].广东:广东海洋大学,2011.
- [12]王建军,成军,刘敏,等.酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白的基因[J].中华肝脏病杂志,2005,13(4):245-248.
- [13]俞宏,姚丽红,陈爱君,等.应用酵母双杂交系统筛选与乙型流感病毒BM2相互作用的蛋白质[J].中华实验和临床病毒学杂志,2005,19(2):182-184.
- [14]丁天冰,张伟,任君萍,等日本脑炎病毒E蛋白在酵母双杂交系统中的表达及其对报告基因激活作用的检测[J].生物技术通讯,2003,14(2):109-112.