牛继敏,牛金中,黄瑜,简纪常,王蓓,鲁义善

• 1:广东海洋大学水产学院
• 2:广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室
• 3:广东省水产经济动物病害控制重点实验室

摘要(Abstract)：

【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)唾液酸黏附素(sialoahesin)在健康鱼及感染无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)后的组织表达,探讨其在免疫反应中的作用。【方法】根据NCBI上公布的罗非鱼唾液酸黏附素基因(Gen Bank登录号LOC102078335,记为On-sialoahesin)克隆On-sialoahesin开放阅读框序列,采用实时荧光定量PCR技术检测On-sialoahesin在健康罗非鱼脾脏、头肾、肠道、皮肤、鳃、脑、肌肉、肝、胸腺、脾、外周血中的分布,以及无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)刺激后的表达。【结果与结论】On-sialoahesin基因编码区1617bp,编码538个氨基酸,理论分子质量59.44ku,等电点6.57。On-sialoahesin含有3个IG结构域和1个IGC2,是IG结构域蛋白质超级家族成员。多序列比对发现,On-sialoahesin与其他物种sialoahesin氨基酸序列同源性介于36.81%～92.94%,且与奈里朴丽鱼(Haplochromis nyererei)同源性最高。系统进化分析发现,On-sialoahesin与慈鲷科鱼的sialoahesin聚为一支。On-sialoahesin在健康罗非鱼各组织中均有表达,在头肾和外周血中表达量最高,其余组织表达量相对较低。经无乳链球菌刺激后,On-sialoahesin表达量在10个组织中均呈现显著的时序性。

关键词(KeyWords)： 尼罗罗非鱼;唾液酸黏附素;基因;克隆;表达;无乳链球菌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金青年基金项目(31702386);; 广东省科技厅国际科技合作领域项目(2017A050501037)

作者(Author): 牛继敏,牛金中,黄瑜,简纪常,王蓓,鲁义善

参考文献(References)：

• [1]王斌.中国罗非鱼出口贸易国际竞争力研究[D].无锡：江南大学,2011.
• [2]陈贺,吴灶和,王蓓,等.无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果[J].广东海洋大学学报,2012,32(6):50-56.
• [3]柯剑,赵飞,罗理,等.广东省罗非鱼主养区无乳链球菌的分离、鉴定与致病性[J].广东海洋大学学报,2010,30(3):22-27.
• [4]郑琦,陈一锦,黄瑜,等.尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(NCC)分离条件的优化[J].广东海洋大学学报,2017,37(3):123-126.
• [5]雷燕,肖洋,赵振峰,等.罗非鱼罗湖病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J].广东海洋大学学报,2019,39(3):1-5.
• [6]吴凤雷,黄瑜,黄郁葱,等.罗湖病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J].广东海洋大学学报,2019,39(5):31-37.
• [7]CROCKER P R,MUCKLOW S,BOUCKSON V,et al.Sialoadhesin,a macrophage sialic acid binding receptor for haemopoietic cells with 17 immunoglobulin-like domains[J].The EMBO Journal,1994,13(19):4490-4503.
• [8]JONES C,VIRJI M,CROCKER P R.Recognition of sialylated meningococcal lipopolysaccharide by siglecs expressed on myeloid cells leads to enhanced bacterial uptake[J].Molecular Microbiology,2003,49(5):1213-1225.
• [9]CROCKER P R,PAULSON J C,VARKI A.Siglecs and their roles in the immune system[J].Nature Reviews.Immunology,2007,7(4):255-266.
• [10]黄瑜.罗非鱼NCC活性调控蛋白及效应因子的鉴定与功能分析[D].湛江:广东海洋大学,2018.
• [11]樊博琳,黎源,汪志文,等.尼罗罗非鱼CD247基因克隆及其组织表达分析[J].广东海洋大学学报,2018,38(6):6-12.
• [12]HUANG Y,ZHENG Q,NIU J Z,et al.NK-lysin from Oreochromis niloticus improves antimicrobial defence against bacterial pathogens[J].Fish&Shellfish Immunology,2018,72:259-265.
• [13]张驰宇,徐顺高,黄新祥.一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立[J].生物化学与生物物理进展,2005,23(9):883-888.
• [14]郭宇立,倪逸声.从一级结构预测蛋白质稳定性--Guruprasad,Reedy和Pandit方法[J].生物化学与生物物理进展,1993(2):95-99.
• [15]ASANO K,KIKUCHI K,TANAKA M.CD169macrophages regulate immune responses toward particulate materials in the circulating fluid[J].The Journal of Biochemistry,2018,164(2):77-85.
• [16]DE BAERE M I,VAN GORP H,DELPUTTE P L,et al.Interaction of the European genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)with sialoadhesin(CD169/Siglec-1)inhibits alveolar macrophage phagocytosis[J].Veterinary Research,2012,43(1):1-10.
• [17]庞碧剑.罗非鱼免疫记忆及体外淋巴细胞增殖的研究[D].湛江：广东海洋大学,2012.
• [18]黄艳青,王桂堂,孙军,等.黄颡鱼血清免疫球蛋白的纯化及分子量的初步测定[J].水生生物学报,2003,27(6):654-656.
• [19]冯建军,关瑞章,林鹏,等.鱼类免疫球蛋白分子生物学研究进展[J].集美大学学报(自然科学版),2010,15(6):420-427.
• [20]黄健,唐晓霞.缺氧缺血性脑病新生儿免疫功能的变化及其影响因素[J].海南医学,2018,29(6):792-793.
• [21]张庆璜.胭脂鱼血清免疫球蛋白单克隆抗体的制备及应用研究[D].重庆：西南大学,2014.
• [22]MATUCCI A,MAGGI E,VULTAGGIO A.Mechanisms of action of Ig preparations:Immunomodulatory and anti-inflammatory effects[J].Frontiers in Immunology,2014,5:690.
• [23]熊怡淞,王皓,吴炜霖,等.定量RT-PCR测定冠心病患者外周血Siglec-1(CD169)的基因表达水平[J].第二军医大学学报,2008,29(11):1307-1310.
• [24]谢周瑞.猪Siglec-1基因启动子克隆及其在肺泡巨噬细胞特异性表达的验证[D].南京：南京农业大学,2012.
• [25]卜梓斌,姜志胜,马珍妮,等.氧化高密度脂蛋白通过MAPKs信号转导途径诱导ECV304细胞表达组织因子[J].中国病理生理杂志,2009,25(4):636-641.
• [25]张艳秋,詹勇,许梓荣.鱼类免疫机制及其影响因子[J].水产养殖,2005,26(3):1-5.