马氏珠母贝α2-巨球蛋白受体结合区酵母双杂交系统的构建及自激活检测Construction and Self-activation Detection of Yeast Two-Hybrid System for α2-Macroglobulin Receptor-Binding Domain of Pinctada martensii
曹丹煜,陈刚,张健东,汤保贵,周晖,施钢,潘传豪,黄建盛,王忠良
摘要(Abstract):
【目的】构建马氏珠母贝(Pinctada martensii)酵母双杂交文库及α2-巨球蛋白受体结合区诱饵载体,检测其在酵母细胞中的自激活作用。【方法】利用CLONTECH SMART技术及酵母体内同源重组的方法构建马氏珠母贝酵母双杂交cDNA文库;将α2-巨球蛋白受体结合区克隆至pGADT7载体,并转化AH109酵母感受态细胞,检测自激活作用。【结果与结论】酵母双杂交文库容量为1.11×107克隆/mL,重组率大于90%;菌落PCR结果显示,插入片段长度均在500bp以上;诱饵质粒成功转化至AH109菌株,且无自激活性,符合文库构建指标,可用于文库筛选。
关键词(KeyWords): 马氏珠母贝;α2-巨球蛋白;酵母双杂交;自激活检测
基金项目(Foundation): 广东省省级科技计划项目(2015A020209169);; 国家自然科学基金项目(31202023);; 广东海洋大学优秀青年骨干教师特别资助计划项目(GDOU2015050214)
作者(Author): 曹丹煜,陈刚,张健东,汤保贵,周晖,施钢,潘传豪,黄建盛,王忠良
参考文献(References):
- [1]WANG Z L,WANG B,CHEN G,et al.Transcriptome analysis of the pearl oyster(Pinctada fucata)hemocytes in response to Vibrio alginolyticus infection[J].Gene,2016,575(2):421-428.
- [2]王忠良,简纪常,鲁义善,等.溶藻弧菌诱导马氏珠母贝血淋巴cDNA差减文库的构建及分析[J].水产学报,2014,38(1):127-135.
- [3]WANG Z L,WANG B,CHEN G,et al.An alpha-2macroglobulin in the pearl oyster Pinctada fucata:Characterization and function in hemocyte phagocytosis of Vibrio alginolyticus[J].Fish&shellfish immunology,2016,55:585-594.
- [4]晏鹤,张俊平,张川,等.α2巨球蛋白的应用研究进展[J].生命的化学,2014,34(2):295-299.
- [5]王有昆,刘萍,段亚飞,等.脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)α2-巨球蛋白c DNA全长的克隆和表达分析[J].渔业科学进展,2015,36(2):63-70.
- [6]胡宝庆,谢彦海,代功园,等.褶纹冠蚌alpha 2巨球蛋白基因的分子克隆与序列分析[J].水生生物学报,2010,34(2):452-458.
- [7]FIELDS S,SONG O.A novel genetic system to detect protein-protein interactions[J].Nature,1989,340(6230):245-246.
- [8]王慧芬.日本对虾免疫相关基因的克隆及功能的初步研究[D].厦门:国家海洋局第三海洋研究所,2008.
- [9]FEI D L,WEI D,YU X L,et al.Screening of binding proteins that interact with Chinese sacbrood virus VP3capsid protein in Apis cerana larvae cDNA library by the yeast two-hybrid method[J].Virus research,2018,248:24-30.
- [10]岳珊珊,夏来新.酵母双杂交筛选与果蝇C(2)M相互作用的蛋白[J].遗传,2015,37(11):1160-1166.
- [11]崔永萍.食管癌相关基因2(ECRG-2)编码蛋白质的功能研究[D].北京:中国协和医科大学,2003.
- [12]李洁.CLN8P相互作用蛋白质筛选,真核表达及检测[D].衡阳:南华大学,2005.